Résumé
Un guide pratique pour les chercheurs travaillant avec l'humanin et son puissant analogue HNG (S14G-humanin), couvrant la reconstitution, les stratégies de dosage, les exigences de stockage, la sélection des analogues et les considérations de sécurité.
La recherche sur l'humanin nécessite une attention particulière à la manipulation et au stockage en raison de l'instabilité inhérente du peptide et de sa courte demi-vie circulante. Ce guide fournit des recommandations pratiques pour les chercheurs travaillant avec l'humanin natif et ses analogues, en particulier HNG (S14G-humanin), qui offre une puissance substantiellement améliorée et est la forme préférée pour la plupart des applications expérimentales.
L'humanin est fourni sous forme de poudre lyophilisée, généralement en quantités de 1 mg ou 5 mg par flacon. La poudre doit être conservée à moins 20 degrés Celsius immédiatement à réception pour une stabilité à long terme. L'humanin natif contient un résidu méthionine en position 1, qui est susceptible à l'oxydation, rendant un stockage et une manipulation corrects essentiels pour maintenir l'activité biologique. Protégez la poudre lyophilisée de la lumière et de l'humidité. Dans des conditions de stockage optimales à moins 20 degrés Celsius, le peptide lyophilisé maintient sa stabilité pendant environ 12 mois.
Pour la reconstitution, utilisez de l'eau stérile ou une solution saline tamponnée au phosphate à pH physiologique (7,2 à 7,4). L'humanin est soluble dans les solutions aqueuses aux concentrations typiquement utilisées en recherche (gamme micromolaire). Pour reconstituer, ajoutez le solvant lentement le long de la paroi interne du flacon, laissez-le mouiller la poudre et tournez doucement jusqu'à dissolution. Ne pas utiliser de vortex ni agiter vigoureusement, car cela peut provoquer une agrégation et une perte d'activité. La solution reconstituée doit être claire. Pour le stockage prolongé du peptide reconstitué, aliquoter en portions à usage unique dans des tubes à faible liaison de protéines et congeler à moins 20 degrés Celsius. Éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.
Le choix entre l'humanin natif et l'analogue HNG est une décision précoce importante dans la conception expérimentale. HNG (S14G-humanin) porte une substitution d'acide aminé unique de la sérine par la glycine en position 14, conférant environ 1000 fois plus de puissance que le peptide natif. Pour la plupart des applications de recherche, HNG est recommandé sauf si l'objectif spécifique nécessite la séquence native.
Le dosage dans les expériences de culture cellulaire varie généralement de 0,01 à 1 micromolaire pour l'humanin natif. Pour HNG, les concentrations effectives sont de 0,01 à 1 nanomolaire. Dans les expériences de neuroprotection, les cellules sont généralement prétraitées avec l'humanin pendant 2 à 4 heures avant l'exposition au stimulus cytotoxique. Les effets protecteurs de l'humanin sont évidents dans les 4 à 6 heures de traitement et persistent jusqu'à 48 heures dans les systèmes de culture.
Les contrôles expérimentaux et la validation sont critiques dans la recherche sur l'humanin. Inclure des contrôles de véhicule appropriés et, si possible, un contrôle de peptide scramblé avec la même composition en acides aminés mais une séquence aléatoire pour confirmer la spécificité des effets.
