SS-31: Guía práctica de investigación y uso

SS-31 es un compuesto de investigación único que requiere un manejo cuidadoso para mantener sus propiedades de orientación mitocondrial. Esta guía cubre los aspectos prácticos de trabajar con SS-31 (elamipretide) en entornos de investigación preclínicos y clínicos, incluyendo preparación, administración, dosificación, almacenamiento y consideraciones de diseño experimental. SS-31 se suministra como polvo liofilizado o, en algunas formulaciones, como solución lista para usar para inyección. La forma liofilizada debe ser un polvo blanco a blanquecino. Almacenar a menos 20 grados Celsius para la estabilidad a largo plazo, donde mantiene la potencia durante 12 a 24 meses bajo condiciones apropiadas. El D-aminoácido (D-arginina) en el N-terminal y la amidación C-terminal confieren mayor resistencia a la degradación enzimática en comparación con los péptidos naturales de L-aminoácidos. El residuo de dimetiltirosina es el componente químicamente más sensible y debe protegerse de la exposición prolongada a la luz. Para la reconstitución de SS-31 liofilizado, use agua estéril, agua bacteriostática (0,9 por ciento de alcohol bencílico) o solución salina estéril según la aplicación prevista. Agregue el solvente lentamente a lo largo de la pared interior del frasco y permita que el polvo se disuelva gradualmente. Es aceptable la agitación suave, pero evite la agitación vigorosa, que puede causar espuma. La solución reconstituida debe ser clara e incolora a amarillo pálido. Para un frasco de 5 mg, reconstituir con 1 mL de solvente produce una concentración de 5 mg por mL. Almacene el SS-31 reconstituido a 2 a 8 grados Celsius y úselo dentro de 14 a 21 días cuando se reconstituya con agua bacteriostática, o dentro de 24 horas cuando se reconstituya con agua estéril sin conservante. Para almacenamiento prolongado, prepare alícuotas y congele a menos 20 grados Celsius. Minimice los ciclos de congelación-descongelación a no más de dos o tres. La dosificación preclínica en modelos murinos normalmente varía de 3 a 10 mg por kg por día, administrados por inyección intraperitoneal. La dosificación más comúnmente utilizada en los estudios publicados es 5 mg por kg por día. Las duraciones del tratamiento varían desde estudios agudos de dosis única hasta protocolos crónicos que duran 8 a 12 semanas. La dosificación clínica establecida a través de ensayos de Fase 2 y Fase 3 usa inyección subcutánea a 0,25 mg por kg por día, lo que corresponde a aproximadamente 15 a 20 mg por día para un adulto de 70 kg. También se han evaluado dosis clínicas más altas de 40 mg por día. La técnica de administración para inyección subcutánea sigue la práctica estándar. Los sitios de inyección preferidos incluyen el abdomen (evitando un radio de 5 centímetros alrededor del ombligo), el muslo anterior y la parte superior del brazo posterior. Rote los sitios de inyección con cada administración. Use jeringas de insulina con agujas de calibre 27 a 31. Inserte la aguja en un ángulo de 45 a 90 grados dependiendo de la profundidad del tejido subcutáneo, inyecte la solución lentamente durante 5 a 10 segundos y mantenga la aguja en su lugar durante 5 segundos antes de retirarla. Para experimentos de cultivo celular in vitro, SS-31 se usa típicamente en concentraciones que van desde nanomolar hasta micromolar bajo. La concentración específica depende del tipo de célula y el ensayo, pero 0,1 a 10 micromolar cubre la mayoría de las aplicaciones. Los parámetros experimentales clave para la investigación de SS-31 incluyen el potencial de membrana mitocondrial medido por los tintes fluorescentes JC-1, TMRE o TMRM; producción de ATP usando ensayos basados en luciferasa; generación de especies reactivas de oxígeno usando MitoSOX Red; tasa de consumo de oxígeno usando el analizador Seahorse XF; contenido y estado de oxidación de cardiolipina. Para estudios cardíacos in vivo, la ecocardiografía para función sistólica y diastólica y la espectroscopía de RM de fósforo-31 para la energética miocárdica son los endpoints de referencia. Los estudios de combinación con precursores de NAD+ requieren un diseño experimental cuidadoso. Al combinar SS-31 con NMN en modelos animales envejecidos, los grupos de tratamiento independientes son esenciales para cuantificar los efectos aditivos versus sinérgicos.