LL-37: guía práctica de investigación y uso

LL-37 se suministra como péptido liofilizado sintético (secuencia LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES, PM 4.493,33 Da), pureza ≥95 %. Se presenta en cantidades de 1, 5 o 10 mg/vial como sal trifluoroacetato o acetato. La sal acetato es preferible: el TFA es citotóxico a concentraciones altas. ## Reconstitución Disolver en agua libre de endotoxinas hasta 1–5 mg/mL. Usar tubos de polipropileno o siliconizados (LL-37 se adsorbe en vidrio/plástico). Para diluciones <1 μM, añadir BSA al 0,01 %. ## In vitro: Ensayo antimicrobiano (CMI) Método de microdilución en caldo según CLSI. Placas de 96 pocillos de polipropileno (¡no poliestireno!). Medio: caldo Mueller-Hinton. CMI típicas: E. coli 2–16 μg/mL, S. aureus 16–64 μg/mL, P. aeruginosa 16–64 μg/mL, C. albicans 8–32 μg/mL. ## Investigación de biopelículas Prevención: LL-37 0,5–16 μg/mL al momento de la inoculación, placas de 96 pocillos, 24 h. Disrupción: biopelículas maduras (24–48 h) + LL-37 32–256 μg/mL, 24 h; tinción LIVE/DEAD. ## In vitro: Inmunomodulación Quimiotaxis: cámaras Boyden modificadas, LL-37 1–10 μM (cámara inferior), 2–4 h. Activación de DC: LL-37 5–20 μM + LPS. Complejos LL-37-ADN: 10–40 μM + ADN genómico (1:1–10:1 en masa) → IFN-I de DC plasmacitoides. ## In vivo Modelos de cicatrización (ratones): 50–200 μg/herida 1–2 v/día en gel. Modelos de infección: 2–10 mg/kg IP. Sepsis: 4 mg/kg IP. ## Almacenamiento Liofilizado: –20 °C (≥24 meses) o –80 °C (≥36 meses). Reconstituido: –20 °C en alícuotas individuales. A 2–8 °C: 1–2 semanas. No recongelar más de 3 veces. ## Control de calidad EM: PM 4.493,33 Da (monoisotópico). HPLC: ≥95 %. LAL: <0,1 EU/mg (crítico para investigación inmunológica — contaminación por LPS confunde resultados). Controles: sLL-37 (secuencia aleatoria), LL-37 desnaturalizado, polimixina B.