SS-31 : Guide pratique de recherche et d'utilisation

SS-31 est un composé de recherche unique qui nécessite une manipulation soigneuse pour maintenir ses propriétés de ciblage mitochondrial. Ce guide couvre les aspects pratiques du travail avec SS-31 (elamipretide) dans des environnements de recherche précliniques et cliniques, y compris la préparation, l'administration, le dosage, le stockage et les considérations de conception expérimentale. SS-31 est fourni sous forme de poudre lyophilisée ou, dans certaines formulations, comme solution prête à l'emploi pour injection. La forme lyophilisée doit être une poudre blanche à blanc cassé. Conserver à moins 20 degrés Celsius pour une stabilité à long terme, où il maintient la puissance pendant 12 à 24 mois dans des conditions appropriées. Le D-aminoacide (D-arginine) en N-terminal et l'amidation C-terminale confèrent une résistance accrue à la dégradation enzymatique par rapport aux peptides naturels à L-aminoacides. Le résidu de diméthyltyrosine est le composant chimiquement le plus sensible et doit être protégé d'une exposition prolongée à la lumière. Pour la reconstitution du SS-31 lyophilisé, utilisez de l'eau stérile, de l'eau bactériostatique (0,9 pour cent d'alcool benzylique) ou du sérum physiologique stérile selon l'application prévue. Ajoutez le solvant lentement le long de la paroi intérieure du flacon et laissez la poudre se dissoudre progressivement. Une agitation douce est acceptable, mais évitez de secouer vigoureusement, ce qui peut provoquer un moussage. La solution reconstituée doit être claire et incolore à légèrement jaune. Pour un flacon de 5 mg, la reconstitution avec 1 mL de solvant donne une concentration de 5 mg par mL. Conservez le SS-31 reconstitué à 2 à 8 degrés Celsius et utilisez-le dans les 14 à 21 jours lorsqu'il est reconstitué avec de l'eau bactériostatique, ou dans les 24 heures lorsqu'il est reconstitué avec de l'eau stérile sans conservateur. Pour le stockage prolongé du peptide reconstitué, préparez des aliquotes et congelez à moins 20 degrés Celsius. Minimisez les cycles de congélation-décongélation à deux ou trois maximum. Le dosage préclinique dans les modèles murins varie généralement de 3 à 10 mg par kg par jour, administrés par injection intrapéritonéale. La posologie la plus couramment utilisée dans les études publiées est de 5 mg par kg par jour. Les durées de traitement vont des études aiguës à dose unique aux protocoles chroniques de 8 à 12 semaines. Le dosage clinique établi via des essais de Phase 2 et Phase 3 utilise une injection sous-cutanée à 0,25 mg par kg par jour, ce qui correspond à environ 15 à 20 mg par jour pour un adulte de 70 kg. Des doses cliniques plus élevées de 40 mg par jour ont également été évaluées. La technique d'administration pour l'injection sous-cutanée suit la pratique standard. Les sites d'injection préférés comprennent l'abdomen (en évitant un rayon de 5 centimètres autour du nombril), la face antérieure de la cuisse et la face postérieure du bras supérieur. Faites tourner les sites d'injection à chaque administration. Utilisez des seringues à insuline avec des aiguilles de calibre 27 à 31. Insérez l'aiguille à un angle de 45 à 90 degrés en fonction de la profondeur du tissu sous-cutané, injectez la solution lentement sur 5 à 10 secondes et maintenez l'aiguille en place pendant 5 secondes avant le retrait. Pour les expériences de culture cellulaire in vitro, SS-31 est généralement utilisé à des concentrations allant du nanomolaire au micromolaire faible. La concentration spécifique dépend du type de cellule et du dosage, mais 0,1 à 10 micromolaire couvre la plupart des applications. Les paramètres expérimentaux clés pour la recherche sur SS-31 comprennent le potentiel de membrane mitochondriale mesuré par les colorants fluorescents JC-1, TMRE ou TMRM ; la production d'ATP à l'aide de dosages à base de luciférase ; la génération d'espèces réactives de l'oxygène à l'aide de MitoSOX Red ; le taux de consommation d'oxygène à l'aide de l'analyseur Seahorse XF ; le contenu et le statut d'oxydation de la cardiolipine. Les études de combinaison avec des précurseurs du NAD+ nécessitent une conception expérimentale soigneuse. Lors de la combinaison de SS-31 avec NMN dans des modèles animaux vieillis, des groupes de traitement indépendants sont essentiels pour quantifier les effets additifs versus synergiques.