LL-37: практическое руководство по исследованиям и применению

LL-37 поставляется как синтетический лиофилизированный пептид (последовательность LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES, МW 4493,33 Da), чистота ≥95%. Выпускается в количествах 1, 5 или 10 мг/флакон как трифторацетатная или ацетатная соль. Ацетатная соль предпочтительна: ТФУ цитотоксична при высоких концентрациях. ## Восстановление Растворить в эндотоксин-свободной воде до 1–5 мг/мл. Использовать полипропиленовые или силиконированные пробирки (LL-37 адсорбируется на стекле/пластике). Для разведений <1 мкМ добавлять 0,01% БСА. ## In vitro: Антимикробное тестирование (МИК) Метод серийного разведения в бульоне по CLSI. 96-луночные полипропиленовые планшеты (не полистирол!). Среда: Mueller-Hinton бульон. Типичные МИК: E. coli 2–16 мкг/мл, S. aureus 16–64 мкг/мл, P. aeruginosa 16–64 мкг/мл, C. albicans 8–32 мкг/мл. ## Исследования биоплёнок Предотвращение: LL-37 0,5–16 мкг/мл в момент инокуляции, 96-луночные планшеты, 24 ч. Разрушение: зрелые биоплёнки (24–48 ч) + LL-37 32–256 мкг/мл, 24 ч; окраска LIVE/DEAD. ## In vitro: Иммуномодуляция Хемотаксис: модифицированные камеры Бойдена, LL-37 1–10 мкМ (нижняя камера), 2–4 ч. Активация ДК: LL-37 5–20 мкМ + ЛПС. Комплексы LL-37-ДНК: 10–40 мкМ + геномная ДНК (1:1–10:1 по массе) → ИФН-I от плазмоцитоидных ДК. ## In vivo Модели заживления ран (мыши): 50–200 мкг/рану 1–2 р/сут в геле. Модели инфекций: 2–10 мг/кг внутрибрюшинно. Сепсис: 4 мг/кг ВБ. ## Хранение Лиофилизированный: –20 °C (≥24 мес) или –80 °C (≥36 мес). Восстановленный: –20 °C разовые аликвоты. При 2–8 °C: 1–2 нед. Не замораживать повторно >3 раз. ## Контроль качества МС: МW 4493,33 Da (монозотопный). ВЭЖХ: ≥95%. LAL: <0,1 EU/мг (важно для иммунологических исследований — загрязнение ЛПС искажает результаты). Контроли: sLL-37 (скрамблированная последовательность), денатурированный LL-37, полимиксин B.