Аннотация
Практическое руководство по исследованиям MOTS-c, охватывающее протоколы восстановления, стратегии дозирования для метаболических исследований и исследований работоспособности, требования к хранению, пути введения и рекомендации по мониторингу безопасности.
Исследование MOTS-c требует внимания к правильному обращению и дизайну экспериментов для обеспечения воспроизводимых результатов с этим метаболически активным митохондриальным пептидом. Данное руководство содержит практические рекомендации для исследователей, работающих с MOTS-c в метаболических, исследованиях работоспособности и старения.
MOTS-c поставляется в виде лиофилизированного порошка, как правило, во флаконах по 5 мг или 10 мг. Порошок должен иметь белый или слегка кремовый цвет. Хранить лиофилизированный MOTS-c при минус 20 градусах Цельсия для оптимальной долгосрочной стабильности. Пептид достаточно стабилен в виде сухого порошка, но следует защищать от повторного температурного циклирования при хранении. При получении проверить целостность уплотнения флакона и немедленно перенести в надлежащее холодное хранение. При оптимальных условиях лиофилизированный MOTS-c сохраняет стабильность приблизительно 12–18 месяцев при минус 20 градусах Цельсия.
Восстановление следует проводить с использованием бактериостатической воды для многоразового применения или стерильной воды для одноразового. Для животных моделей, требующих внутрибрюшинной инъекции, в качестве носителя можно использовать стерильный физиологический раствор (0,9% хлорид натрия) или PBS. Типичное восстановление для флакона 5 мг использует 1 мл растворителя, давая концентрацию 5 мг/мл. Хранить восстановленный MOTS-c при 2–8 градусах Цельсия и использовать в течение 14–21 дня.
Протоколы дозирования для MOTS-c варьируются в зависимости от типа исследования. В мышиных метаболических исследованиях наиболее часто используемая доза составляет 5 мг/кг массы тела в день через внутрибрюшинную инъекцию. Эта доза использовалась в исследованиях здоровья костей (12 недель), кардиопротекции (4 дня), ожирения, вызванного диетой, и возрастного снижения физической работоспособности. Для экспериментов с клеточными культурами MOTS-c обычно используется в концентрациях от 0,1 до 10 микромолей.
Путь введения является важным соображением. Внутрибрюшинная инъекция является стандартным путём для мышиных исследований. Исследователям следует учитывать, что MOTS-c неэффективно проникает через гематоэнцефалический барьер, поэтому нейропротективные исследования требуют интрацеребровентрикулярного введения.
Ключевые экспериментальные показатели для исследований MOTS-c включают фосфорилирование AMPK (Thr172) и его нижестоящие мишени ACC (Ser79) по вестерн-блоттингу, поглощение глюкозы, маркеры биогенеза митохондрий (PGC-1alpha, TFAM), окисление жирных кислот, показатели физической работоспособности (выносливость на беговой дорожке, сила захвата, баланс на ротароде), состав тела, тесты на толерантность к глюкозе и инсулину, а также воспалительные маркеры в тканях и сыворотке.
