Аннотация
Практическое руководство для исследований kisspeptin-10, охватывающее реконституцию пептида, протоколы дозирования для внутривенного и подкожного введения, соображения по дизайну эксперимента для исследований репродуктивных гормонов, требования к хранению и параметры мониторинга безопасности.
Kisspeptin-10 поставляется для исследовательских целей в виде лиофилизированного белого порошка, как правило, во флаконах, содержащих 1 мг или 5 мг пептида. Данное руководство охватывает практические аспекты работы с kisspeptin-10 на основе опубликованных клинических исследовательских протоколов.
Реконституция kisspeptin-10 требует внимания к химическим свойствам пептида. Предпочтительным растворителем для исследовательских препаратов является стерильный физиологический раствор (0,9% хлорид натрия) или стерильная вода для инъекций в зависимости от предполагаемого пути введения. Для реконституции флакона 1 мг добавьте 1 мл выбранного растворителя медленно вдоль внутренней стенки флакона, получая концентрацию 1 мг/мл (1000 мкг/мл). Осторожно вращайте для растворения; не встряхивайте.
Исследовательское дозирование kisspeptin-10 в клинических исследованиях на людях обычно использовало протоколы на основе веса, с дозами, выражаемыми в наномолях на килограмм массы тела. Молекулярная масса kisspeptin-10 составляет приблизительно 1302 дальтона. Опубликованные клинические исследовательские протоколы использовали внутривенные болюсные дозы от 0,1 до 1,0 нмоль/кг, при этом 0,3 нмоль/кг является часто используемой дозой, дающей выраженный ответ LH. Для человека весом 70 кг 0,3 нмоль/кг равняется 21 нмоль, или приблизительно 27,3 мкг.
Внутривенное болюсное введение является наиболее тщательно охарактеризованным путём в клинических исследованиях. Стандартный протокол включает введение рассчитанной дозы за 1–2 минуты с серийным забором крови в предопределённых интервалах для измерения LH, FSH, тестостерона или эстрадиола. Типичный протокол отбора образцов включает базальный забор крови и образцы после инъекции на 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 180 и 240 минутах. Ответ LH обычно достигает пика в течение 30–60 минут от внутривенного введения и возвращается к исходному уровню в течение 2–4 часов.
Экспериментальные соображения особенно важны при работе с kisspeptin-10 ввиду динамичной природы оси репродуктивных гормонов. Ответы LH и FSH на киссептин зависят от уровня половых стероидов, что означает, что результаты различаются между мужчинами и женщинами, в течение менструального цикла у женщин и между гонадально интактными и гипогонадными субъектами.
Доза-ответная зависимость для kisspeptin-10 нелинейна: низкие дозы вызывают пульсирующие ответы LH, напоминающие физиологическую пульсирующую секрецию GnRH, а более высокие дозы вызывают более устойчивое, тоническое повышение LH.
Хранение kisspeptin-10 следует стандартным рекомендациям по обращению с пептидами. Лиофилизированный пептид следует хранить при минус 20 до минус 80 градусов Цельсия, защищённым от света и влаги. Реконституированные растворы для использования в тот же день следует держать при 2–8 градусах Цельсия. Пептиды киссептина содержат остаток триптофана, чувствительный к окислению, поэтому защита от света особенно важна.
Мониторинг безопасности в исследованиях kisspeptin-10 должен включать базальное и серийное измерение репродуктивных гормонов (LH, FSH, тестостерон или эстрадиол). Субъекты с гормоночувствительными состояниями (гормонозависимые опухоли, эндометриоз, преждевременное половое созревание) должны быть исключены из исследовательских протоколов.
