Аннотация
Практическое руководство по GHK-Cu, охватывающее подходы к топическому и инъекционному введению, концентрации, основанные на опубликованных исследованиях, протоколы восстановления, требования к хранению и вопросы безопасности для исследовательского применения.
GHK-Cu всесторонне изучен как в топических, так и в системных применениях, причём опубликованные исследования предоставляют чёткое руководство по параметрам разработки препаратов, диапазонам концентраций, методам введения и условиям хранения. Данное руководство обобщает практические знания, накопленные за десятилетия изучения GHK-Cu, для поддержки строгого дизайна экспериментов и надлежащего обращения с препаратом.
Топические препараты представляют собой наиболее распространённый способ применения GHK-Cu в косметических и дерматологических исследованиях. В опубликованных исследованиях и коммерческих продуктах обычно используются концентрации от одного до двух процентов GHK-Cu на водной основе сыворотки или в кремовых препаратах. Исследования проницаемости показали, что пептид и его медный комплекс могут эффективно проникать через роговой слой, причём всасывание усиливается при физиологических диапазонах pH от 5,5 до 7,4. Присутствие иона меди существенно для биологической активности, поскольку апо-пептид GHK без меди демонстрирует значительно сниженную эффективность в стимуляции синтеза коллагена и изменений экспрессии генов. Препараты должны быть надлежащим образом забуферированы и защищены от компонентов, которые могут конкурировать за связывание меди или восстанавливать ион меди.
Для исследований заживления ран GHK-Cu был включён в различные системы доставки, включая раневые повязки на основе коллагена, гидрогели и матрицы из электроспряденных нановолокон. В исследованиях с коллагеновыми повязками, показавших ускоренное заживление в моделях диабетических крыс, биотинилированный GHK-Cu был непосредственно интегрирован в коллагеновую матрицу для обеспечения локальной доставки с замедленным высвобождением. В гидрогелевых препаратах использовались концентрации от пятидесяти микромоль до одного миллимоля в зависимости от дизайна исследования и целевой ткани. Эти более высокие концентрации в системах локальной доставки контрастируют с наномолярными концентрациями, при которых GHK-Cu биологически активен, отражая необходимость учёта диффузионных барьеров и деградации в раневой среде.
Реконституция и приготовление растворов GHK-Cu требуют внимания к нескольким факторам. Пептид обычно поставляется в виде лиофилизированного порошка, часто в форме соли медного комплекса. Реконституцию следует проводить с использованием стерильной дистиллированной воды или физиологического фосфатного буфера при физиологическом pH. Полученный раствор должен иметь светло-голубой цвет вследствие присутствия иона меди. Если раствор бесцветный, это может свидетельствовать о недостаточном комплексообразовании с медью, и для обеспечения полного металлирования может потребоваться добавление небольшого количества хлорида меди или сульфата меди. Восстановленный раствор следует стерильно профильтровать через мембрану 0,22 микрометра перед использованием в клеточных культурах или исследованиях in vivo.
Условия хранения существенно влияют на стабильность GHK-Cu. Лиофилизированный порошок GHK-Cu следует хранить при минус двадцати градусах Цельсия в осушенной среде, где он остаётся стабильным в течение двух-трёх лет. Восстановленные водные растворы следует охлаждать при температуре от двух до восьми градусов Цельсия для краткосрочного использования — до двух недель — или разливать на аликвоты и замораживать при минус двадцати градусах Цельсия для более длительного хранения — до трёх месяцев. Следует избегать повторных циклов замораживания-оттаивания, поскольку они могут вызывать агрегацию пептида и диссоциацию меди. Растворы необходимо защищать от света, поскольку воздействие ультрафиолета может катализировать опосредованное медью окисление пептидного остова.
Протоколы нанесения в опубликованных косметических исследованиях обычно предусматривают двукратное ежедневное нанесение на чистую кожу, при этом продолжительность исследований составляет от четырёх недель до трёх месяцев. В исследованиях по заживлению ран повязки меняют согласно стандартным протоколам ухода за ранами, как правило каждые один-три дня. При работе с клеточными культурами in vitro GHK-Cu добавляют в культуральную среду в концентрациях от одного до десяти наномоль для стимуляции на физиологическом уровне или до ста наномоль для характеристики зависимости ответа от дозы.
Профиль безопасности GHK-Cu хорошо изучен для различных путей введения. Местное нанесение не сопровождается сообщениями о раздражении, сенсибилизации или фототоксичности. Пептид является природным компонентом плазмы крови человека и присутствует в концентрации приблизительно двести нанограмм на миллилитр у молодых взрослых, при этом его уровень снижается с возрастом. Этот эндогенный статус подтверждает его благоприятный токсикологический профиль. Исследователи должны учитывать, что, хотя GHK-Cu снижает токсичность свободной меди путём хелатирования, препараты с избыточными свободными ионами меди сверх связывающей способности пептида теоретически могут вызывать окислительный стресс, что обусловливает важность точного стехиометрического приготовления.
