Zusammenfassung
Ein praktischer Leitfaden für LL-37-Forschungsprotokolle: Peptidvorbereitung, Rekonstitution, Dosierung für antimikrobielle und immunmodulatorische Forschung, Verabreichungswege, In-vitro- und In-vivo-Protokolle, Lagerung und Sicherheitserwägungen.
LL-37 wird als synthetisches lyophilisiertes Peptid geliefert (Sequenz LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES, MW 4.493,33 Da), Reinheit ≥95 %. Erhältlich in Mengen von 1, 5 oder 10 mg/Fläschchen als Trifluoracetatsalz oder Acetatsalz. Acetatsalz bevorzugt: TFA ist bei höheren Peptidkonzentrationen zytotoxisch.
## Rekonstitution
In endotoxinfreiem Wasser bis zu 1–5 mg/mL auflösen. Polypropylen- oder silikonisierte Röhrchen verwenden (LL-37 adsorbiert an Glas/Plastik). Für Verdünnungen <1 μM: 0,01 % BSA zugeben.
## In vitro: Antimikrobielles Testen (MHK)
Bouillon-Mikrodilutions-Methode nach CLSI. 96-Well-Polypropylensplatten (kein Polystyrol!). Medium: Mueller-Hinton-Bouillon. Typische MHK: E. coli 2–16 μg/mL, S. aureus 16–64 μg/mL, P. aeruginosa 16–64 μg/mL, C. albicans 8–32 μg/mL.
## Biofilm-Forschung
Prävention: LL-37 0,5–16 μg/mL zum Inokulationszeitpunkt, 96-Well-Platten, 24 h. Disruption: Reife Biofilme (24–48 h) + LL-37 32–256 μg/mL, 24 h; LIVE/DEAD-Färbung.
## In vitro: Immunmodulation
Chemotaxis: Modifizierte Boyden-Kammern, LL-37 1–10 μM (untere Kammer), 2–4 h. DC-Aktivierung: LL-37 5–20 μM + LPS. LL-37-DNA-Komplexe: 10–40 μM + genomische DNA (1:1–10:1 nach Masse) → IFN-I von plasmacytoiden DC.
## In vivo
Wundheilungsmodelle (Mäuse): 50–200 μg/Wunde 1–2×/Tag in Gel. Infektionsmodelle: 2–10 mg/kg IP. Sepsis: 4 mg/kg IP.
## Lagerung
Lyophilisiert: –20 °C (≥24 Monate) oder –80 °C (≥36 Monate). Rekonstituiert: –20 °C in Einzelaliquots. Bei 2–8 °C: 1–2 Wochen. Nicht mehr als 3× einfrieren-auftauen.
## Qualitätskontrolle
MS: MW 4.493,33 Da (monoisotopisch). HPLC: ≥95 %. LAL: <0,1 EU/mg (kritisch für immunologische Forschung — LPS-Kontamination verfälscht Ergebnisse). Kontrollen: sLL-37 (Scrambled-Sequenz), denaturiertes LL-37, Polymyxin B.
